MAF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427213

概要

Maf1は、RNAポリメラーゼIIIの産生量を調節し、栄養やストレスのシグナルに応じて生合成を協調させる、保存性の高い転写抑制因子MAF1をコードします。マウス細胞では、MAF1の活性がTORC1/mTORをはじめとする複数のキナーゼ経路を統合し、tRNAおよび5S rRNAの転写を制御することで、代謝状態をプロテオスタシスや細胞増殖と結び付けます。Pol III依存的転写の制御を介して、MAF1は細胞増殖、細胞ストレス応答、エネルギーホメオスタシスのプログラムに影響します。Pol III制御や代謝シグナル伝達経路の破綻は、成長表現型の変化や疾患に関連する過程と関連付けられており、そのためMaf1は、代謝、ストレス適応、増殖制御に関する機構研究において有用な結節点となります。

MAF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMaf1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Maf1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Maf1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MAF1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MAF1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Maf1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MAF1の機能に不可欠なMaf1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Maf1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MAF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMAF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Maf1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MAF1 HDRプラスミド（m）および MAF1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMaf1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMaf1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。