MAD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401885-ACT

ヒトMAD1L1は、有糸分裂停止欠損1（MAD1）をコードしており、これは紡錘体組立チェックポイント（SAC）の中核構成因子の一つである。SACは、キネトコアと微小管の結合を監視することで染色体分配を保護する。MAD1はMAD2や他のチェックポイント因子と協調して有糸分裂チェックポイント複合体（MCC）の形成を促進し、適切な両極性（バイオリエンテーション）が達成されるまでAPC/C-CDC20の活性を抑制することで、異数性および染色体不安定性を抑える。有糸分裂のタイミング制御とチェックポイントシグナル伝達における役割を通じて、MAD1L1はゲノム維持と細胞周期進行を結び付ける経路の研究でしばしば解析対象となっている。MAD1L1に関連するチェックポイント制御の破綻は、複数のがんの文脈や有糸分裂の忠実性が低下したモデルで観察される染色体不安定性表現型に関与すると示唆されている。

MAD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAD1L1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MAD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAD1L1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAD1L1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MAD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAD1L1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMAD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAD1L1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMAD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。