MacroH2A Double Nickase Plasmid (h): sc-407013-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MacroH2A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MacroH2A Double-Nickase-Plasmid (h) und MacroH2A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf H2AFY2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MacroH2A: sc-377452
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MacroH2A Double Nickase Plasmid (h) | sc-407013-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MacroH2A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407013-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H2AFY2 kodiert macroH2A, eine Histonvariante von H2A, die zur Etablierung spezialisierter Chromatinzustände beiträgt und die Transkriptionsleistung im gesamten Genom moduliert. Die Ablagerung von macroH2A ist mit epigenetischem Gedächtnis, X‑Chromosom-assoziierter Chromatinregulation und stabiler Genrepression verknüpft und überschneidet sich mit Signalwegen, die den Zellzyklusverlauf, die Linienfestlegung und stressresponsive Transkription steuern. Durch die Beeinflussung der Nukleosomendynamik und der Chromatinzugänglichkeit trägt macroH2A zur Regulation DNA‑matrizenabhängiger Prozesse einschließlich DNA‑Reparatur und Replikations‑Timing bei. Eine dysregulierte Balance der macroH2A‑Isoformen und veränderte Chromatinbelegung wurden mit gestörten Differenzierungsprogrammen und krebsrelevanten transkriptionellen Phänotypen in Verbindung gebracht, was H2AFY2 zu einem interessanten Ziel in der Epigenetik- und Tumorbiologieforschung macht.
MacroH2A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des H2AFY2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von H2AFY2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die H2AFY2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit H2AFY2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.