Plasmide Double Nickase (h) mAChR M5: sc-402943-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) mAChR M5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide mAChR M5 Double Nickase (h) et le plasmide mAChR M5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CHRM5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) mAChR M5 | sc-402943-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) mAChR M5 | sc-402943-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM5 code le récepteur muscarinique humain de l’acétylcholine M5 (mAChR M5), un récepteur couplé aux protéines G qui active principalement la signalisation via Gq/11 afin de stimuler la phospholipase C, la production d’inositol trisphosphate/diacylglycérol, la mobilisation intracellulaire de Ca²⁺ et l’activité en aval des voies PKC et MAPK. Par ces cascades, M5 peut moduler l’excitabilité neuronale, la transmission synaptique et les réponses neurovasculaires, tout en influençant, de manière dépendante du type cellulaire, des processus sécrétoires et du muscle lisse. L’expression de CHRM5 et la dynamique de la signalisation cholinergique sont souvent étudiées dans le contexte de la régulation des circuits dopaminergiques, de la neuroinflammation et de phénotypes comportementaux pertinents pour la recherche sur l’usage de substances et d’autres domaines de la neuropsychiatrie.
mAChR M5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRM5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRM5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRM5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRM5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.