Lyn Double Nickase Plasmid (h): sc-400463-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Lyn Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Lyn Double-Nickase-Plasmid (h) und Lyn Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LYN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Lyn: sc-7274
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Lyn Double Nickase Plasmid (h) | sc-400463-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Lyn Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400463-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **LYN** kodiert **Lyn**, eine nichtrezeptorische Tyrosinkinase der Src-Familie, die Signale von Immunrezeptoren und Zytokinrezeptoren mit nachgeschalteten Signalwegen koppelt, welche Proliferation, Überleben, Adhäsion und zytoskelettales Remodeling steuern. Lyn phosphoryliert ITAM-haltige Adapterproteine und moduliert die Signalübertragung über Netzwerke des B‑Zell‑Rezeptors, des Fc‑Rezeptors und von Integrinen; dabei greift es in PI3K–AKT-, MAPK- und NF‑κB‑Kaskaden ein. In hämatopoetischen Zelllinien wirkt Lyn zudem an der Rückkopplungskontrolle von Aktivierungsschwellen über inhibitorische Rezeptoren und Phosphatasen mit und prägt so angeborene und adaptive Immunantworten. Eine fehlregulierte LYN‑Aktivität oder -Expression wurde in verschiedenen Krankheitskontexten mit aberranter Entzündungssignalgebung und veränderter Wachstumssignalgebung in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz als mechanistischer Knotenpunkt in der Immunologie- und Krebsforschung unterstützt.
Lyn Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LYN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LYN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LYN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LYN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.