Plasmide CRISPR d'Activation (h) LXR beta/NER/NR1H2: sc-400691-ACT

NR1H2 code pour le récepteur X du foie bêta (LXRβ), un récepteur nucléaire activé par des ligands qui forme des hétérodimères avec RXR afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant l’efflux du cholestérol, l’homéostasie lipidique et la signalisation inflammatoire. LXRβ intègre la détection des stérols à l’expression de gènes métaboliques, influençant des voies telles que le transport inverse du cholestérol (notamment via la régulation d’ABCA1/ABCG1), la biologie des macrophages transformés en cellules spumeuses, ainsi que les interactions avec des réponses inflammatoires liées à NF-κB. Dans les tissus humains et des modèles cellulaires, une activité altérée de LXRβ a été associée à une dérégulation du métabolisme lipidique et à des états inflammatoires pertinents pour l’athérosclérose, les dysfonctions métaboliques et la neuroinflammation, ce qui étaye des études mécanistiques en immunométabolisme et en neurobiologie.

LXR beta/NER/NR1H2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NR1H2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LXR beta/NER/NR1H2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NR1H2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NR1H2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LXR beta/NER/NR1H2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NR1H2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LXR beta/NER/NR1H2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LXR beta/NER/NR1H2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NR1H2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.