Lunatic Fringe CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421414

概要

Lfngは、ゴルジ体に局在するβ1,3-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼであるLunatic Fringeをコードしており、NOTCH受容体上のO-フコシル化された上皮成長因子（EGF）様リピートを修飾します。Lunatic FringeはNotch受容体とリガンドの相互作用を変化させることで、Notchシグナルの強度と振動ダイナミクスを調整し、マウス発生における体節の分節、境界形成、細胞運命決定を制御します。Lfngの活性はセグメンテーション・クロック（分節時計）および、複数の組織にわたって前駆細胞の維持や分化に影響する、より広範なNotch依存性プログラムと関連しています。LFNG/Notch調節の破綻は発生パターニング異常と関係しており、モデル系においてNotch経路が疾患関連表現型に与える寄与を研究するための機構的な手がかりを提供します。

Lunatic Fringe CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLfng遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lfng内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lfngのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Lunatic Fringeタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Lunatic Fringeシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lfng欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Lunatic Fringeの機能に不可欠なLfngエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lfngゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Lunatic Fringe CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLunatic Fringe CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lfng遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Lunatic Fringe HDRプラスミド（m）および Lunatic Fringe HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLfngホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLfng標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。