Plasmide CRISPR d'Activation (h) LTRPC7: sc-402820-ACT

TRPM7 (LTRPC7) code une protéine bifonctionnelle canal-kinase qui conduit des cations divalents, en particulier Mg²⁺ et Ca²⁺, et couple l’homéostasie ionique à la signalisation intracellulaire via son domaine kinase sérine/thréonine. L’activité de TRPM7 influence le potentiel de membrane, la dynamique du cytosquelette, ainsi que l’adhérence et la migration cellulaires, en s’intégrant aux voies qui régissent la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. En régulant des processus enzymatiques dépendants du Mg²⁺ et une signalisation liée au Ca²⁺, TRPM7 contribue au contrôle du métabolisme et de la survie cellulaires. Une expression ou une fonction dérégulée de TRPM7 a été associée à une excitabilité altérée et à des programmes de remodelage impliqués dans divers modèles de lésions neurologiques, dans la physiopathologie cardiovasculaire et dans des phénotypes de cellules cancéreuses, ce qui étaye son intérêt comme cible mécanistique en génomique fonctionnelle.

LTRPC7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRPM7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LTRPC7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRPM7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRPM7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LTRPC7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRPM7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LTRPC7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LTRPC7 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRPM7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.