LTBP-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403182-ACT

LTBP2 kodiert das latente Transforming-Growth-Factor-β-Bindeprotein 2 (LTBP-2), ein extrazelluläres Matrix-Glykoprotein, das mit fibrillinreichen Mikrofibrillen assoziiert und zur Matrixassemblierung, Elastizität sowie zur Zell–Matrix-Signalübertragung beiträgt. Obwohl ihm im Vergleich zu anderen Mitgliedern der LTBP-Familie die kanonische TGF-β-Bindung fehlt, beeinflusst LTBP-2 die Mikrofibrillenarchitektur und kann indirekt die Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren sowie mechanotransduktive Signalwege modulieren, die mit dem Umbau der extrazellulären Matrix verknüpft sind. Die Expression von LTBP2 ist für die Homöostase des Bindegewebes sowie für die Gefäß- und Augenbiologie relevant; genetische und Expressionsstudien bringen es mit Erkrankungen in Verbindung, die die Integrität von Mikrofibrillen beeinträchtigen, darunter Glaukom-Phänotypen und erbliche Bindegewebsanomalien. Als matrixassoziierter Faktor wird LTBP-2 häufig im Kontext von Signalwegen untersucht, die die Organisation der ECM, Zelladhäsion und die durch Gewebesteifigkeit gesteuerte Regulation des Zellverhaltens kontrollieren.

LTBP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LTBP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LTBP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LTBP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LTBP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LTBP-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LTBP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LTBP-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LTBP-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LTBP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.