Plásmido Doble Nickase (m) LSD1: sc-430289-NIC

El gen Kdm1a de ratón codifica la desmetilasa de lisina 1 (LSD1), una enzima cromatínica dependiente de FAD que elimina marcas mono- y dimetiladas de H3K4 y, en ciertos contextos, de H3K9. Mediante interacciones con complejos correpresores/correguladores transcripcionales como CoREST/HDAC y otros, LSD1 coordina los estados de potenciadores (enhancers) y promotores que controlan el compromiso de linaje, los programas del ciclo celular y la diferenciación. La actividad de LSD1 conecta la remodelación epigenética con redes de señalización y transcripción que gobiernan el mantenimiento de células madre, la expresión génica durante el neurodesarrollo y la maduración de células inmunitarias. La desregulación de la represión o activación cromatínica dependiente de LSD1 se ha asociado con proliferación aberrante y estados de diferenciación alterados en múltiples modelos biológicos relevantes para enfermedad, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en la investigación en epigenética.

LSD1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Kdm1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Kdm1a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Kdm1a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Kdm1a alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.