Plasmide Double Nickase (h) LSD1: sc-401294-NIC

KDM1A code la lysine-déméthylase spécifique 1 (LSD1), une amine oxydase dépendante du FAD qui retire les marques mono‑ et di‑méthylées de l’histone H3 (principalement H3K4 et, selon le contexte, H3K9) afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. LSD1 agit au sein de complexes corépresseurs et de remodelage de la chromatine tels que CoREST et NuRD, reliant la déméthylation des histones à la méthylation de l’ADN, à la régulation des enhancers et à l’expression génique spécifique de lignée. Par ces mécanismes épigénétiques, LSD1 influence la progression du cycle cellulaire, la différenciation et le maintien d’états de type « souches ». Une activité dérégulée de KDM1A et une composition altérée des complexes de LSD1 ont été associées à un contrôle transcriptionnel aberrant dans de nombreux cancers ainsi que dans d’autres maladies impliquant une dérégulation épigénétique.

LSD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KDM1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KDM1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KDM1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KDM1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.