Particules Lentivirales d'Activation (h) LRP5: sc-401331-LAC

LRP5 (low-density lipoprotein receptor–related protein 5) est un co‑récepteur transmembranaire à passage unique qui coopère avec les récepteurs Frizzled pour transduire la signalisation canonique Wnt/β‑caténine. En régulant la stabilisation de la β‑caténine et la transcription dépendante de TCF/LEF, LRP5 influence la différenciation des ostéoblastes, l’acquisition de la masse osseuse et l’homéostasie tissulaire, et contribue également à la régulation métabolique et à la biologie vasculaire. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de LRP5 sont associées à des phénotypes squelettiques et à des troubles de la densité osseuse, et une altération de la signalisation Wnt/LRP5 a été impliquée dans la tumorigenèse et d’autres pathologies liées à une prolifération et une différenciation dérégulées. LRP5 est donc largement étudiée dans les voies contrôlant la signalisation du développement, la mécanotransduction osseuse et les programmes transcriptionnels induits par Wnt.

Les particules d'activation lentivirales LRP5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de LRP5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LRP5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription LRP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LRP5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif LRP5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.