LRP130 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402029-ACT

LRPPRCは、ロイシンに富むペンタトリコペプチドリピート含有タンパク質（LRP130）をコードしており、主にミトコンドリアに局在するRNA結合因子である。LRP130は、ミトコンドリアにコードされた転写産物の転写後プロセシング、安定性、翻訳を制御する。酸化的リン酸化（OXPHOS）構成要素の発現を協調的に調節することで、LRP130は呼吸鎖のアセンブリ、ミトコンドリアのエネルギー代謝、ならびに代謝ストレスへの細胞適応を支える。LRPPRCはミトコンドリア遺伝子発現の品質管理とも関与し、ミトコンドリアと核の間のコミュニケーション経路（ミトニュークリア通信）に影響を及ぼし得る。LRPPRCの制御異常は、ミトコンドリア機能障害の表現型や神経・代謝性疾患の病態と関連づけられており、バイオエネルゲティクスおよびミトコンドリア恒常性の研究において重要な対象となる。

LRP130 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LRPPRCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LRP130 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LRPPRC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLRPPRC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LRP130の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLRPPRC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLRP130依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLRPPRC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLRP130経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。