LRP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400638-NIC

LRP1（低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質1）は、多機能なエンドサイトーシス受容体であり、シグナル伝達受容体でもあります。リポタンパク質、プロテアーゼ‐阻害因子複合体、細胞外マトリックス成分など、多様なリガンドの取り込みとクリアランスを媒介します。アダプタータンパク質との相互作用や、TGF-β、MAPK/ERK、PI3K–AKT といった経路とのクロストークを通じて、LRP1 は受容体トラフィッキング、脂質恒常性、細胞遊走、ならびに細胞生存プログラムに影響を与えます。神経系および血管系においては、血液脳関門を介した輸送やプロテオリシスの調節にも関与し、神経変性、動脈硬化、がんに伴う浸潤生物学などに関連する機構との結びつきが示されています。これらの役割により、LRP1 は、エンドサイトーシス依存的シグナル伝達、細胞外マトリックスのリモデリング、脂質に駆動される細胞表現型を研究するうえで有用な結節点となります。

LRP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LRP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LRP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LRP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LRP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。