LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421462

概要

Zbtb7a は、BTB/POZ 型ジンクフィンガー転写因子である LRF/Pokemon をコードしており、配列特異的な DNA 結合とコリプレッサー複合体のリクルートを介して、細胞系譜の決定、増殖、生存を制御する。造血・免疫の文脈では、B 細胞および T 細胞の発生プログラムの協調に寄与し、赤芽球系の成熟に影響を与えるとともに、分化に関連する転写ネットワークを調節する。LRF/Pokemon は、ARF–p53 腫瘍抑制シグナルに対する機能的拮抗など、細胞周期チェックポイントやストレス応答を制御する経路と交差し、標的遺伝子座におけるクロマチン状態を再編成し得る。Zbtb7a 活性の変化は、血液系および固形腫瘍のモデルにおける腫瘍性の転写プログラムや異常な分化表現型に関与することが示唆されており、腫瘍形成機構や細胞運命制御のメカニズム研究において重要なノードとなる。

LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるZbtb7a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Zbtb7a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Zbtb7aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LRF/Pokemonタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LRF/Pokemonシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Zbtb7a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LRF/Pokemonの機能に不可欠なZbtb7aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Zbtb7aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Zbtb7a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LRF/Pokemon HDRプラスミド（m）および LRF/Pokemon HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZbtb7aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZbtb7a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。