LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402016

概要

ZBTB7Aは、転写因子LRF/Pokemon（FBI-1とも呼ばれる）をコードしています。LRF/PokemonはBTB/POZドメインとジンクフィンガーを有するタンパク質で、GCリッチなDNA配列に結合し、細胞運命の決定を制御する遺伝子発現プログラムを調節します。また、クロマチン依存的な転写抑制に関与し、増殖・分化・系譜決定を司る経路と連携します。さらに、代謝遺伝子やストレス応答遺伝子の制御にも、状況依存的に関与します。LRF/Pokemonは造血および免疫細胞の発生と関連し、赤血球系成熟やリンパ系分化に与える影響が研究されています。ZBTB7Aの活性または発現の変化は、がんなどの増殖性疾患における転写ネットワークの破綻と関連づけられており、腫瘍化機構や発生経路のメカニズム研究における重要性が示唆されています。

LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZBTB7A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZBTB7A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZBTB7Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LRF/Pokemonタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LRF/Pokemonシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZBTB7A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LRF/Pokemonの機能に不可欠なZBTB7Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZBTB7Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZBTB7A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LRF/Pokemon HDRプラスミド（h）および LRF/Pokemon HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZBTB7Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZBTB7A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。