Plasmide Double Nickase (h) LPL: sc-400751-NIC

LPL code la lipoprotéine lipase, une enzyme sécrétée et ancrée à l’endothélium qui hydrolyse les triglycérides des chylomicrons et des VLDL circulants afin de libérer des acides gras libres, ensuite captés par le muscle et le tissu adipeux. Cette activité coordonne les programmes d’absorption, de stockage et d’oxydation des lipides, et s’inscrit à l’interface des processus de transport lipidique et de remodelage des lipoprotéines impliquant les apolipoprotéines et les protéoglycanes à héparane sulfate. En raison de son rôle central dans la clairance des lipoprotéines riches en triglycérides, LPL est largement étudiée dans l’homéostasie métabolique et les phénotypes liés aux dyslipidémies. Une altération de la fonction ou de la régulation de LPL est associée à l’hypertriglycéridémie et à la biologie du risque cardiométabolique en aval, ce qui en fait une cible fréquente d’études mécanistiques du métabolisme lipidique.

LPL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LPL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LPL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LPL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LPL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.