Plasmide Double Nickase (h) LPGAT1: sc-411390-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LPGAT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LPGAT1 Double Nickase (h) et le plasmide LPGAT1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LPGAT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) LPGAT1 | sc-411390-NIC | 20 µg | $410.00 |
LPGAT1 (lysophosphatidylglycerol acyltransferase 1) code une acyltransférase qui catalyse la réacylation du lysophosphatidylglycérol en phosphatidylglycérol, contribuant au maintien de l’homéostasie des glycérophospholipides et de la composition membranaire. En modulant le remodelage des phospholipides au sein du cycle de Lands, LPGAT1 influence la biogenèse des membranes, la fonction des organites et les processus de signalisation médiés par les lipides. Une perturbation de la composition des chaînes acyles des phospholipides est associée au stress métabolique, à un dysfonctionnement des membranes mitochondriales et du réticulum endoplasmique (RE), ainsi qu’à des altérations de la bioénergétique cellulaire, ce qui fait de LPGAT1 une cible pertinente pour l’étude du métabolisme lipidique et des phénotypes liés aux membranes. Des voies de remodelage lipidique dérégulées ont été associées, dans des études génétiques et fonctionnelles, à des traits cardiométaboliques et hépatiques, ce qui soutient l’exploration de LPGAT1 dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.
LPGAT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LPGAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LPGAT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LPGAT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LPGAT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.