LOK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423191

Panoramica

Stk10 codifica la lymphocyte-oriented kinase (LOK), una chinasi serina/treonina della famiglia STE20 che nel topo collega la segnalazione a monte al rimodellamento del citoscheletro e al comportamento delle cellule immunitarie. LOK partecipa a vie che regolano la dinamica dell’actina, la polarità cellulare e l’adesione, influenzando processi come la migrazione dei linfociti, l’organizzazione della sinapsi immunologica e la risposta ai segnali di attivazione. In ambito ematopoietico, alterazioni della segnalazione STK10/LOK sono state associate a una regolazione anomala dell’omeostasi immunitaria e a fenotipi aberranti di motilità cellulare, rendendola rilevante per studi sulla biologia legata all’infiammazione. La funzione di LOK interseca inoltre checkpoint controllati da chinasi che modulano programmi di proliferazione e sopravvivenza, supportando studi meccanicistici sulle reti di segnalazione in stati cellulari normali e patologicamente rilevanti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LOK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Stk10 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Stk10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Stk10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LOK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Stk10 per lo studio della segnalazione di LOK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Stk10 critici per la funzione di LOK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Stk10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LOK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LOK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Stk10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LOK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LOK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Stk10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Stk10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.