Plasmide CRISPR d'Activation (h) LMO4: sc-401636-ACT

LMO4 (LIM domain only 4) code une protéine adaptatrice nucléaire de type « LIM-only » qui assemble des complexes multiprotéiques de régulation transcriptionnelle sans se lier directement à l’ADN. En faisant le pont entre des facteurs de transcription et des cofacteurs, LMO4 influence les décisions de destin cellulaire, les programmes de différenciation et la prolifération dépendante du contexte via la modulation des réseaux de régulation génique. Elle a été impliquée dans des processus de développement et la mise en place des tissus, et une expression altérée de LMO4 ou des circuits régulateurs associés a été liée à une dérégulation du contrôle transcriptionnel dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment en biologie du cancer et dans des phénotypes neurodéveloppementaux. En tant que co-régulateur nodal, LMO4 est fréquemment étudiée pour son rôle dans l’ajustement de la transcription sensible aux voies de signalisation et des sorties d’expression génique dépendantes de la chromatine.

LMO4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LMO4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LMO4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LMO4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LMO4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LMO4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LMO4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LMO4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LMO4 dans les cellules tumorales présentant une expression de LMO4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.