Plásmido Doble Nickase (m) LMO2: sc-421447-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)LMO2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LMO2 (m) y el plásmido de doble nickasa LMO2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Lmo2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LMO2 Anticuerpo (1A9-1): sc-65736
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) LMO2 | sc-421447-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) LMO2 | sc-421447-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lmo2 codifica la proteína LMO2, que contiene únicamente dominios LIM, un adaptador nuclear que ensambla complejos de transcripción multiproteicos que controlan decisiones sobre el destino celular. En la hematopoyesis murina, LMO2 participa en redes reguladoras junto con factores como TAL1/SCL, proteínas GATA y LDB1 para coordinar programas de expresión génica que sostienen el mantenimiento de células madre y progenitoras, la diferenciación eritroide y el desarrollo vascular. La circuitería transcripcional asociada a LMO2 se entrecruza con procesos más amplios de cromatina y de especificación de linaje que influyen en la dinámica de proliferación y diferenciación. La expresión desregulada de Lmo2 o una composición alterada de sus complejos se utiliza ampliamente como modelo para estudiar mecanismos de reprogramación transcripcional leucemogénica y la biología de enfermedades hematológicas relacionadas, tanto in vivo como en células cultivadas.
LMO2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Lmo2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Lmo2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Lmo2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Lmo2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.