Plasmide CRISPR d'Activation (r) LKB1: sc-437297-ACT

LKB1 (également connu sous le nom de STK11) code une sérine/thréonine kinase qui agit comme un régulateur maître de l’homéostasie énergétique cellulaire en activant les kinases de la famille AMPK et en coordonnant les réponses au stress métabolique. Dans les cellules de rat, LKB1 intègre les signaux liés aux nutriments et à la polarité afin d’influencer le métabolisme mitochondrial, l’autophagie et le maintien de la polarité épithéliale via des voies incluant la signalisation AMPK–mTOR. Son activité affecte la progression du cycle cellulaire et la survie en conditions de faible énergie, reliant le statut de LKB1 à des phénotypes impliquant une altération du contrôle de la croissance et de l’adaptation métabolique. La dérégulation des réseaux de signalisation associés à LKB1 est largement étudiée dans des contextes d’homéostasie tissulaire, d’inflammation et de transformation oncogénique, où les programmes de détection de l’énergie et de polarité sont perturbés.

LKB1 Le plasmide d'activation CRISPR (r) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LKB1 Le plasmide d'activation CRISPR (r) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LKB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LKB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LKB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.