LIF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401120-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LIF Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- LIF CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal LIF CRISPR Activation Plasmid (h) e dal LIF CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di LIF. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LIF Antibody (E-10): sc-515931
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LIF Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-401120-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il fattore inibitore della leucemia umana (LIF) è una citochina pleiotropica della famiglia dell’IL-6 che segnala attraverso il complesso recettoriale LIFR/gp130 per attivare le vie JAK/STAT3, MAPK/ERK e PI3K/AKT. LIF regola decisioni sul destino cellulare, tra cui autorinnovamento delle cellule staminali, differenziamento, sopravvivenza e crosstalk infiammatorio, con effetti dipendenti dal contesto nei tessuti in sviluppo e in quelli adulti. Una segnalazione di LIF deregolata è stata implicata nelle interazioni tumore–stroma, nella modulazione immunitaria, nel rimodellamento associato alla fibrosi e nella biologia riproduttiva, rendendolo un nodo utile per l’interrogazione delle vie di segnalazione in modelli rilevanti per la malattia. In quanto fattore secreto, LIF supporta anche studi sulla segnalazione paracrina, sulle reti di citochine extracellulari e sui programmi trascrizionali a valle di STAT3.
LIF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LIF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
LIF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LIF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LIF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LIF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LIF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LIF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LIF nelle cellule tumorali con espressione di LIF silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.