Plásmido Doble Nickase (h) LI-cadherin: sc-401229-NIC

CDH17 codifica la LI-cadherina, una molécula de adhesión célula–célula dependiente de calcio de la superfamilia de las cadherinas, enriquecida en el intestino, que favorece la cohesión y la polaridad epiteliales. A diferencia de las cadherinas clásicas, la LI-cadherina presenta una arquitectura extracelular distintiva y puede influir en la organización de las uniones, la función de barrera y los programas de diferenciación en los epitelios gastrointestinales. La dinámica de adhesión asociada a CDH17 se cruza con vías que regulan la arquitectura y la motilidad epiteliales, incluyendo la interacción con la remodelación del citoesqueleto y con estados transcripcionales regulados por Wnt/β-catenina. Se ha informado de una expresión desregulada de LI-cadherina en múltiples patologías gastrointestinales y con frecuencia se estudia como marcador de linaje epitelial y de organización tisular alterada en biología del cáncer.

LI-cadherin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDH17 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDH17. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDH17. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDH17 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.