LHX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421428

概要

Lhx5 は、発生中の中枢神経系のパターン形成と分化に必須な、核内DNA結合性の調節因子であるLIMホメオボックス転写因子 LHX5 をコードします。マウスでは、LHX5 はLIMドメイン依存的な転写プログラムを介して領域特異性や神経系譜の規定に寄与し、神経新生や軸索ガイダンスを制御するより広範なホメオボックスネットワークとも交差します。LHX5 活性の変化は前脳および海馬の発生異常と、それに伴う神経発達表現型に関連しており、神経回路形成の分子機構研究における重要な標的となります。転写調節因子としてのLHX5は、神経前駆細胞や分化過程のニューロンにおける細胞運命決定や成熟状態を形作る下流の遺伝子発現カスケードに影響を与えます。

LHX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLhx5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lhx5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lhx5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LHX5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LHX5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lhx5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LHX5の機能に不可欠なLhx5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lhx5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LHX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLHX5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lhx5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LHX5 HDRプラスミド（m）および LHX5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLhx5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLhx5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。