LHX1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403100-ACT

LHX1（LIM homeobox 1）は、LIMドメインをもつ転写因子をコードしており、胚発生の過程で系譜の決定や組織パターン形成を統合的に制御します。神経、腎臓、生殖路の発生などに関与することが知られています。LHX1は、ホメオボックスを介してDNAに結合し、LIM相互作用によって転写複合体を形成することで、細胞運命の決定、形態形成、分化を制御するプログラムを調節します。LHX1の発現異常や発生プログラムの改変は先天異常との関連が示唆されており、また発生制御因子が再活性化されるがん関連の転写状態でも観察されています。発生における遺伝子制御ネットワークの要所（ノード）として、LHX1は幹細胞分化、器官形成モデル、ならびに組織アイデンティティの転写制御の研究で頻繁に扱われています。

LHX1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LHX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LHX1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LHX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLHX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LHX1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLHX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLHX1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLHX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLHX1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。