LEREPO4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427290

Übersicht

Zc3h15 codiert das Mausprotein LEREPO4, einen vorhergesagten Zinkfinger‑RNA‑Bindefaktor, der an der posttranskriptionellen Genregulation beteiligt ist, einschließlich der Kontrolle von mRNA‑Stabilität, ‑Prozessierung und ‑Translation. Indem Zc3h15 das Schicksal von RNA mitbestimmt, kann es signalkaskadenabhängige transkriptionelle Outputs und zelluläre Programme wie Proliferation, Differenzierung und Stressantworten beeinflussen. Eine Fehlregulation von RNA‑Bindungsproteinen und den zugehörigen Ribonukleoprotein‑Komplexen ist breit mit veränderter Immun-Signalgebung und onkogenen Phänotypen verknüpft, wodurch Zc3h15 einen relevanten Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur Kontrolle der Genexpression darstellt. In Mausmodellsystemen kann eine Perturbation von Zc3h15 genutzt werden, um zu untersuchen, wie RNA‑zentrierte Regulation die Aktivität von Signalwegen und Zellzustandsübergänge moduliert.

Das LEREPO4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zc3h15-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zc3h15-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zc3h15 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LEREPO4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zc3h15-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LEREPO4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zc3h15-Exone abzielen, die für die LEREPO4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zc3h15-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LEREPO4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LEREPO4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zc3h15-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LEREPO4 HDR-Plasmid (m) und LEREPO4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zc3h15-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zc3h15-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.