LENG4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-408536

概要

MBOAT7は小胞体に局在する膜結合型O-アシルトランスフェラーゼをコードしており、アラキドノイルCoAを取り込むことでホスファチジルイノシトールをリモデリングし、細胞内のホスホイノシチド組成とそれに続くシグナル伝達を形作ります。膜脂質の恒常性に対する作用を通じて、MBOAT7は小胞輸送、細胞骨格動態、炎症応答を制御するPI由来のシグナル伝達ノードに影響します。MBOAT7の活性または発現の変化は、脂質恒常性の破綻や肝障害への感受性を含む代謝・肝臓関連の表現型と関連づけられており、免疫代謝やストレスシグナルの研究において重要です。LENG4（leukocyte receptor cluster member 4）は、免疫に関連する文脈での役割が明らかになりつつあるヒトタンパク質であり、適切な細胞モデルにおける脂質シグナルと免疫のクロストークを経路レベルで検討することを可能にします。

LENG4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMBOAT7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MBOAT7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MBOAT7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LENG4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LENG4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MBOAT7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LENG4の機能に不可欠なMBOAT7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MBOAT7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LENG4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLENG4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MBOAT7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LENG4 HDRプラスミド（h）および LENG4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMBOAT7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMBOAT7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。