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LDH-A双切口酶质粒(h) | sc-400403-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LDH-A双切口酶质粒(h2) | sc-400403-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 **LDHA** 基因编码乳酸脱氢酶A(LDH-A),这是一种细胞质酶,催化丙酮酸与乳酸之间的相互转化,并伴随 NADH/NAD+ 的再循环,从而在高增殖或缺氧条件下支持糖酵解途径的 ATP 生成。LDH-A 是中心碳代谢中的关键节点,连接糖酵解与乳酸发酵,并影响氧化还原平衡、丙酮酸代谢通量以及与细胞外微环境之间的代谢物交换。通过促进 NAD+ 再生和乳酸输出,LDH-A 参与与葡萄糖利用改变和应激适应相关的代谢重编程。LDHA 表达或活性失调与多种疾病背景下观察到的代谢表型有关,并常被用于研究增殖、缺氧信号以及生物能量的可塑性。
LDH-A 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 LDHA 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对LDHA内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏LDHA的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了LDHA基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。