Lck CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421397

概要

Lck（リンパ球特異的プロテインチロシンキナーゼ）はSrcファミリーのキナーゼであり、CD3のITAMモチーフをリン酸化してZAP70のリクルートと活性化を促進し、その結果として下流のLAT/SLP-76シグナロソームの組み立てを導くことで、T細胞受容体（TCR）シグナル伝達を開始します。マウス免疫細胞においてLckは、抗原認識をカルシウムフラックス、MAPK活性化、ならびにNFAT、NF-κB、AP-1に制御される転写プログラムへと結びつける近位シグナル伝達イベントを調節し、胸腺細胞の発生および末梢T細胞の活性化を形作ります。Lck活性は共受容体（CD4/CD8）シグナルと統合され、リン酸化依存的に活性型／不活性型コンフォメーションを切り替えることで調節されるため、リンパ球のシグナル伝達閾値の中核を担います。Lck依存性経路の破綻は、免疫活性化の変調、リンパ増殖、造血系における異常なチロシンキナーゼシグナル伝達のモデルとしてしばしば用いられます。

Lck CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLck遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lck内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lckのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Lckタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Lckシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lck欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Lckの機能に不可欠なLckエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lckゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Lck CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびLck CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lck遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Lck HDRプラスミド（m）および Lck HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLckホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLck標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。