Particules Lentivirales d'Activation (h) LAR: sc-402674-LAC

La protéine tyrosine phosphatase récepteur de type F (PTPRF), également appelée LAR, est une tyrosine phosphatase protéique de type récepteur qui module la signalisation dépendante de la phosphorylation à la membrane plasmique ainsi qu’aux interfaces cellule–cellule ou cellule–matrice. LAR influence la dynamique des adhésions focales, la croissance des neurites et l’organisation synaptique en régulant des voies en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase et de la signalisation associée aux intégrines, affectant le remodelage du cytosquelette et la migration cellulaire. Grâce à ses domaines extracellulaires de type adhésif et à son activité phosphatase intracellulaire, PTPRF peut ajuster les sorties des voies MAPK/ERK et PI3K/AKT via la déphosphorylation de substrats sélectionnés. Une dérégulation de la signalisation PTPRF/LAR a été associée à une altération de la signalisation métabolique et à des phénotypes neurodéveloppementaux ou neurodégénératifs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques portant sur la signalisation de l’insuline, la connectivité neuronale et les programmes cellulaires liés à l’invasion.

Les particules d'activation lentivirales LAR (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PTPRF dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LAR (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PTPRF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LAR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PTPRF ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.