LAMP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400120-ACT

Das lysosomenassoziierte Membran-Glykoprotein 1 (LAMP1) ist ein sehr häufig vorkommendes Typ‑I-Transmembranprotein der lysosomalen Begrenzungsmembran, das zur Aufrechterhaltung der Lysosomenintegrität beiträgt und die Dynamik der Vesikelfusion unterstützt. Es ist an endo-lysosomalem Transport, Lysophagie und dem autophagischen Flux beteiligt und beeinflusst damit den Abbau und das Recycling von Fracht in Signalwegen, die mit mTOR-Signaling und Stressantworten verknüpft sind. Die durch LAMP1 vermittelte Positionierung von Lysosomen und die Stabilität der Membran modulieren außerdem Exozytose und Antigenprozessierung in Immunzellen und verbinden so die Lysosomenbiologie mit entzündlicher Signalübertragung. Eine dysregulierte LAMP1-Expression und gestörte Lysosomenfunktion stehen mit Neurodegeneration, infektionsbedingten Wirt–Erreger-Interaktionen und der Anpassung von Krebszellen an metabolischen Stress in Zusammenhang, was LAMP1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für Signalweg-Analysen macht.

LAMP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LAMP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LAMP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LAMP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LAMP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LAMP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LAMP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LAMP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LAMP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LAMP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.