LAMP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400120-ACT

リソソーム関連膜糖タンパク質1（LAMP1）は、リソソーム限界膜に豊富に存在するI型膜貫通タンパク質で、リソソームの完全性を維持し、小胞融合ダイナミクスを支えます。エンドソーム‐リソソーム輸送、リソソームファジー、オートファジーフラックスに関与し、mTORシグナルやストレス応答と交差する分解・リサイクル経路におけるカーゴの分解と再利用に影響を与えます。LAMP1を介したリソソームの細胞内配置や膜安定性は、免疫細胞におけるエキソサイトーシスおよび抗原処理も調節し、リソソーム生物学を炎症性シグナル伝達と結び付けます。LAMP1発現やリソソーム機能の破綻は、神経変性、感染に伴う宿主‐病原体相互作用、ならびに代謝ストレスへのがん細胞の適応と関連しており、経路レベルの解析に有用な結節点となります。

LAMP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LAMP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LAMP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LAMP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLAMP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LAMP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLAMP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLAMP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLAMP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLAMP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。