Plasmide Double Nickase (h) LAIR-1: sc-403542-NIC

Le récepteur de type immunoglobuline associé aux leucocytes 1 (LAIR1) code LAIR-1, un récepteur inhibiteur du collagène largement exprimé sur les cellules immunitaires, qui atténue leur activation via une signalisation reposant sur un motif inhibiteur à base de tyrosine des immunorécepteurs (ITIM). Lors de la liaison au ligand, LAIR-1 recrute des phosphatases telles que SHP-1/SHP-2 afin de contrebalancer les voies dépendantes des kinases en aval des récepteurs de l’antigène et de la signalisation des cytokines, modulant ainsi les seuils de prolifération, de production de cytokines et de réponses cytotoxiques. Cet axe de signalisation, comparable à un point de contrôle, influence l’adhérence et la migration des leucocytes dans des microenvironnements riches en collagène et module le dialogue entre immunité innée et adaptative. Une activité dérégulée de LAIR-1 a été associée à une altération de l’homéostasie immunitaire et à des phénotypes inflammatoires, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes tels que l’auto-immunité, les infections et les interactions tumeur–système immunitaire.

LAIR-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAIR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAIR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAIR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAIR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.