Plasmide CRISPR d'Activation (h) LAGE-1: sc-403565-ACT

CTAG2 code pour LAGE-1, un antigène cancer/testis dont l’expression est très limitée dans les tissus normaux de l’adulte et qui est fréquemment réexprimé dans de nombreux types de tumeurs. LAGE-1 est impliqué dans des programmes transcriptionnels associés aux tumeurs et dans des états cellulaires liés à la prolifération et à la reconnaissance immunitaire, et il est couramment étudié aux côtés d’antigènes apparentés, tels que les membres de la famille MAGE, dans le contexte de la présentation d’antigènes et de l’immunobiologie tumorale. Bien que son rôle mécanistique précis reste imparfaitement défini, l’expression de CTAG2 est largement utilisée comme biomarqueur de l’antigénicité tumorale et de l’état de lignée, soutenant des recherches sur la réactivation épigénétique, la signalisation oncogénique et les phénotypes d’échappement immunitaire. Une expression dérégulée de CTAG2/LAGE-1 a été rapportée dans des cancers variés, ce qui la rend pertinente pour l’étude de l’hétérogénéité tumorale et des pressions de sélection induites par les antigènes.

LAGE-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CTAG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LAGE-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CTAG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CTAG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LAGE-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CTAG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LAGE-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LAGE-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CTAG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.