L-type Ca⁺⁺ CP γ8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407391

概要

CACNG8 は、L 型 Ca++ チャネルの補助サブユニット γ8 をコードしており、興奮性細胞における電位依存性カルシウムチャネル複合体の輸送（トラフィッキング）、ゲーティング、および膜での安定性を調節する膜貫通性の制御因子です。Ca2+ 流入を調整することで、γ8 は膜脱分極を、神経細胞の興奮性、シナプス伝達、ならびに活動依存的遺伝子発現を制御する下流経路へと結び付けるカルシウム依存性シグナル伝達ネットワークに影響を及ぼします。CACNG8 の機能変化は神経生理学的表現型との関連が示唆されており、発作感受性や、カルシウムシグナルの制御不全に関係する他の疾患に関連した機序に寄与する可能性があります。イオンチャネルの巨大分子複合体の構成要素として、CACNG8 はチャネル複合体の組成や、補助サブユニットの攪乱が細胞にもたらす影響を研究するための手がかりとなります。

L-type Ca++ CP γ8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCACNG8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CACNG8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CACNG8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、L-type Ca++ CP γ8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、L-type Ca++ CP γ8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CACNG8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• L-type Ca++ CP γ8の機能に不可欠なCACNG8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CACNG8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• L-type Ca++ CP γ8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびL-type Ca++ CP γ8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CACNG8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  L-type Ca++ CP γ8 HDRプラスミド（h）および L-type Ca++ CP γ8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCACNG8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCACNG8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。