Plasmide Double Nickase (h) L-type Ca⁺⁺ CP β2: sc-403900-NIC

CACNB2 code la sous-unité auxiliaire β2 des canaux calciques de type L dépendants du voltage, en régulant le trafic des canaux, leur expression membranaire et les cinétiques d’ouverture/fermeture qui façonnent l’influx de Ca2+ lors de la dépolarisation. En modulant l’activité des canaux CaV1, CACNB2 influence le couplage excitation–contraction, la transmission synaptique et la régulation génique dépendante de l’activité via des voies sensibles au calcium telles que la signalisation CaMK et calcineurine/NFAT. Une altération de la fonction de CACNB2 a été associée à des anomalies électriques et de signalisation dans les tissus excitables et est fréquemment étudiée dans le contexte de la susceptibilité aux arythmies, de phénotypes neuropsychiatriques et d’autres troubles liés aux canaux calciques. En tant que sous-unité accessoire, β2 influe aussi sur la sensibilité pharmacologique et les propriétés biophysiques des courants calciques de type L, ce qui la rend pertinente pour des études mécanistiques des canalopathies.

L-type Ca++ CP β2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CACNB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CACNB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CACNB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CACNB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.