Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plásmido Doble Nickase (h) L-type Ca++ CP α1S: sc-402713-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)L-type Ca++ CP α1S consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa L-type Ca++ CP α1S (h) y el plásmido de doble nickasa L-type Ca++ CP α1S (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CACNA1S. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: L-type Ca++ CP α1S Anticuerpo (G-1): sc-514685
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) L-type Ca++ CP α1S | sc-402713-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) L-type Ca++ CP α1S | sc-402713-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1S codifica la subunidad α1S formadora del poro del canal de calcio tipo L del músculo esquelético (CaV1.1), que funciona como el principal sensor de voltaje en el acoplamiento excitación–contracción. Tras la despolarización de la membrana, CaV1.1 se comunica con la señalización del receptor de rianodina para coordinar la liberación de Ca2+ desde el retículo sarcoplásmico y la regulación posterior, dependiente de Ca2+, de la contracción muscular y de programas de expresión génica. Este complejo de canal se integra con las vías de excitabilidad de membrana y de homeostasis del calcio que moldean la fisiología de las fibras musculares y la señalización dependiente de la actividad. La variación genética en CACNA1S se ha asociado con canalopatías del músculo esquelético que afectan el manejo de Ca2+ y la función contráctil, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de fenotipos neuromusculares.
L-type Ca++ CP α1S El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CACNA1S en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CACNA1S. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CACNA1S. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CACNA1S alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.