Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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L-type Ca++ CP α1S Double Nickase Plasmid (h): sc-402713-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das L-type Ca++ CP α1S Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- L-type Ca++ CP α1S Double-Nickase-Plasmid (h) und L-type Ca++ CP α1S Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CACNA1S abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: L-type Ca++ CP α1S: sc-514685
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
L-type Ca++ CP α1S Double Nickase Plasmid (h) | sc-402713-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
L-type Ca++ CP α1S Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402713-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1S kodiert die porenbildende α1S‑Untereinheit des L‑Typ‑Calciumkanals der Skelettmuskulatur (CaV1.1), der als primärer Spannungssensor bei der Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung fungiert. Nach Membrandepolarisation kommuniziert CaV1.1 mit der Ryanodinrezeptor‑Signalgebung, um die Ca2+-Freisetzung aus dem sarkoplasmatischen Retikulum sowie die nachgeschaltete Ca2+-abhängige Regulation der Muskelkontraktion und von Genexpressionsprogrammen zu koordinieren. Dieser Kanalkomplex ist in Signalwege der Membranerregbarkeit und der Calciumhomöostase eingebunden, die die Physiologie der Muskelfaser und die aktivitätsabhängige Signalübertragung prägen. Genetische Varianten in CACNA1S wurden mit Kanalopathien der Skelettmuskulatur in Zusammenhang gebracht, die das Ca2+-Handling und die kontraktile Funktion beeinträchtigen, was seine Relevanz für mechanistische Studien neuromuskulärer Phänotypen unterstreicht.
L-type Ca++ CP α1S Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CACNA1S-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CACNA1S abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CACNA1S-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CACNA1S-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.