Plásmido CRISPR de Activación (h) L-type Ca++ CP α1S: sc-402713-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) L-type Ca++ CP α1S es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) L-type Ca++ CP α1S incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR L-type Ca++ CP α1S (h) y el plásmido de activación CRISPR L-type Ca++ CP α1S (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de CACNA1S. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: L-type Ca++ CP α1S Anticuerpo (G-1): sc-514685
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) L-type Ca++ CP α1S | sc-402713-ACT | 20 µg | $397.00 |
CACNA1S codifica la subunidad α1S formadora del poro del canal de calcio tipo L dependiente de voltaje del músculo esquelético (CaV1.1), un componente clave del complejo del receptor de dihidropiridina en la membrana de los túbulos transversos. Tras la despolarización de la membrana, CaV1.1 se acopla eléctricamente al receptor de rianodina 1 para iniciar el acoplamiento excitación–contracción y regular el flujo de calcio que determina la dinámica de contracción de las fibras musculares. Este canal participa en redes de señalización dependientes de calcio que influyen en el desarrollo muscular, la homeostasis metabólica y la expresión génica dependiente de la actividad. Las alteraciones genéticas y funcionales en CACNA1S se han asociado con canalopatías del músculo esquelético y con susceptibilidad a una regulación anómala del manejo del calcio, lo que respalda su relevancia en estudios de la fisiología neuromuscular y de los mecanismos de enfermedad.
L-type Ca++ CP α1S El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CACNA1S sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
L-type Ca++ CP α1S El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CACNA1S en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CACNA1S, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de L-type Ca++ CP α1S. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CACNA1S y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de L-type Ca++ CP α1S en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía L-type Ca++ CP α1S en células tumorales con expresión de CACNA1S silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.