Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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L-Plastin Double Nickase Plasmid (h): sc-402131-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das L-Plastin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- L-Plastin Double-Nickase-Plasmid (h) und L-Plastin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LCP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: L-Plastin: sc-133218
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
L-Plastin Double Nickase Plasmid (h) | sc-402131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
L-Plastin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LCP1 kodiert L‑Plastin, ein Actin-bündelndes Protein, das überwiegend in hämatopoetischen Zelllinien exprimiert wird, filamentöse Actin-Netzwerke stabilisiert und die dynamische Umgestaltung des Zytoskeletts unterstützt. L‑Plastin trägt über die Koordination von Actin-Umsatz und Signalgebung an der Plasmamembran zu integrinabhängiger Adhäsion, Zellmotilität, der Bildung immunologischer Synapsen und phagozytischen Prozessen bei. Eine Regulation durch Phosphorylierung verknüpft L‑Plastin mit Signalwegen, die die Aktivierung und das Trafficking von Leukozyten steuern, einschließlich chemokingetriebener Migration und entzündlicher Antworten. Eine aberrante Expression oder Aktivität von LCP1 wurde mit verändertem Verhalten von Immunzellen in Verbindung gebracht und in Kontexten wie Tumorzellinvasion, metastatischem Potenzial und Immundysregulation untersucht.
L-Plastin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LCP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LCP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LCP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LCP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.