KV6.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413962

概要

KCNG4はKv6.3サブユニットをコードしており、電位依存性カリウムチャネルファミリーに属する「電気的にサイレント」なメンバーです。Kv6.3はKv2チャネルのαサブユニットとヘテロ四量体を形成することで膜興奮性を調節します。この調節作用を通じて、Kv6.3は活動電位の波形、発火閾値、再分極の速度論に影響し、イオン恒常性や興奮性に関連するシグナル伝達過程に組み込まれています。KCNG4の発現は興奮性組織で報告されており、神経・感覚シグナル伝達や平滑筋の電気的挙動を制御する経路と関連しています。カリウムチャネル調節因子の機能異常は広く興奮性障害に関与するとされていることから、KCNG4は、疾患関連の細胞モデルにおけるイオンチャネルの組成と機能を解明する機序研究の標的として有用です。

KV6.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNG4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNG4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNG4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KV6.3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KV6.3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNG4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KV6.3の機能に不可欠なKCNG4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNG4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KV6.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKV6.3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNG4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KV6.3 HDRプラスミド（h）および KV6.3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNG4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNG4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。