Plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.1 (h): sc-403806

Présentation

KCNA1 code la sous-unité humaine du canal potassique voltage‑dépendant KV1.1, un composant formant le pore qui contribue aux courants potassiques K+ de type rectificateur tardif et détermine l’excitabilité membranaire. KV1.1 influence la repolarisation du potentiel d’action, la fréquence de décharge et la transmission synaptique, reliant ainsi l’activité du canal à la signalisation neuronale et à la stabilité des réseaux. En contrôlant le potentiel de membrane au repos et l’entrée de Ca2+ dépendante de l’excitabilité, KV1.1 s’inscrit au carrefour de voies qui régulent la libération de neurotransmetteurs et l’expression génique dépendante de l’activité. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de KCNA1 sont associées à des phénotypes neurologiques, notamment l’ataxie épisodique et une susceptibilité aux crises, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des canalopathies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KV1.1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNA1 pour l'étude de la signalisation de KV1.1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNA1 essentiels à la fonction de KV1.1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KV1.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KV1.1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KV1.1 plasmide HDR (h) et le KV1.1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.