KLK14 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405655-NIC

KLK14は、分泌型のトリプシン様セリンプロテアーゼであるカリクレイン関連ペプチダーゼ14をコードし、細胞外でのタンパク質分解や、細胞周囲の微小環境の再構築に寄与します。KLK14の活性は、マトリックス成分のプロセシング、ペプチド基質の活性化／不活性化、ならびに上皮の恒常性やバリア機能を形作るプロテアーゼカスケードの調節に影響し得ます。KLK14の発現や活性の破綻は、組織リモデリングの変化や炎症シグナルの変調と関連づけられており、プロテアーゼ駆動の変化が浸潤関連プロセスに影響するという観点から、がん生物学の文脈でしばしば研究されています。ヒト遺伝子としてのKLK14は、細胞外マトリックスの組織化、プロテアーゼ—抗プロテアーゼのバランス、ならびに細胞—細胞／細胞—マトリックス相互作用に関する経路解析においても重要です。

KLK14 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KLK14 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KLK14内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KLK14の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KLK14が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。