Plásmido Doble Nickase (h) KLHL9: sc-406655-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)KLHL9 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa KLHL9 (h) y el plásmido de doble nickasa KLHL9 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KLHL9. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) KLHL9 | sc-406655-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) KLHL9 | sc-406655-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KLHL9 codifica una proteína de la familia BTB–BACK–Kelch que funciona como adaptador de sustratos dentro de los complejos de ubiquitina ligasa E3 tipo RING dependientes de Cullin-3 (CUL3), ayudando a conferir especificidad al recambio de proteínas dependiente de ubiquitina. Mediante la ubiquitinación regulada, KLHL9 contribuye a la proteostasis celular e influye en procesos vinculados con la organización del citoesqueleto y la progresión del ciclo celular, incluido el control mitótico. La alteración de KLHL9 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuromusculares, en consonancia con la importancia de una señalización de ubiquitina equilibrada en tejidos excitables y de larga vida. Como proteína humana de la familia KLHL, se estudia con frecuencia en vías que conectan el reconocimiento de sustratos por ligasas E3 con respuestas al estrés y la homeostasis celular.
KLHL9 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KLHL9 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KLHL9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KLHL9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KLHL9 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.