KLHL9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-433908

概要

Klhl9 はマウスの KLHL9 タンパク質をコードしており、BTB–BACK–Kelch ファミリーに属する基質アダプターとして、CUL3-RBX1 E3 ユビキチンリガーゼ複合体と協調して特定のクライアントタンパク質のユビキチン化と、プロテアソーム依存的分解（ターンオーバー）を促進します。このユビキチン介在性のプロテオスタシス制御を通じて、KLHL9 はタンパク質品質管理、細胞周期に連動したプロセス、ならびに基質の適時クリアランスに依存するシグナル出力の調節に寄与します。CUL3–KLHL アダプターの機能異常は、神経発生、神経筋生物学、がんに伴うプロテオームのリモデリングに関与するユビキチン経路の破綻と広く関連しており、Klhl9 はユビキチン–プロテアソーム系の特異性を研究するうえで有用なノードとなります。マウスモデルでは、機能喪失（loss-of-function）アプローチにより、KLHL9 依存的な基質選択が、定義された組織や細胞種における下流の細胞表現型をどのように形作るかを解析できます。

KLHL9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるKlhl9遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Klhl9内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Klhl9のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KLHL9タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KLHL9シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Klhl9欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KLHL9の機能に不可欠なKlhl9エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Klhl9ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KLHL9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびKLHL9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Klhl9遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KLHL9 HDRプラスミド（m）および KLHL9 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKlhl9ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKlhl9標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。