Particules Lentivirales d'Activation (h) KLF17: sc-414317-LAC

KLF17 (Krüppel-like factor 17) code un facteur de transcription à doigts de zinc qui régule des programmes d’expression génique liés à la différenciation épithéliale, à l’identité cellulaire et au contrôle transcriptionnel de la prolifération ainsi que des réseaux associés à la motilité. En tant que régulateur se liant à l’ADN, KLF17 s’intègre à des voies transcriptionnelles plus larges et à des mécanismes de modulation de la chromatine qui façonnent des états d’expression spécifiques de lignée et une signalisation répondant au stress. Une activité altérée de KLF17 a été associée à une plasticité épithélio-mésenchymateuse dérégulée et à des modifications des signatures transcriptionnelles liées à l’invasion, ce qui en fait une cible d’intérêt pour l’étude de la progression tumorale et du potentiel métastatique. Dans des systèmes modèles humains, KLF17 est couramment étudié pour ses effets sur les transitions d’état cellulaire, la migration et la régulation, dépendante du contexte, de cibles en aval.

Les particules d'activation lentivirales KLF17 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de KLF17 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales KLF17 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription KLF17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de KLF17. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif KLF17 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.