Plasmide Double Nickase (h) KiSS-1: sc-402710-NIC

KISS1 code pour KiSS-1, une protéine précurseur sécrétée, ensuite clivée en kisspeptines, qui signalent principalement via l’axe GPR54/KISS1R afin de réguler la migration cellulaire, l’invasion et la signalisation endocrinienne. L’activité de KiSS-1 s’entrecroise avec des voies dépendantes des GPCR, notamment PLC/PKC, les flux intracellulaires de calcium et la signalisation MAPK, en façonnant des programmes transcriptionnels liés au potentiel métastatique et au contrôle neuroendocrinien de la reproduction. Une expression altérée de KISS1 a été associée à la progression tumorale et à la dissémination métastatique dans plusieurs contextes de cancer, ainsi qu’à une dysrégulation de l’axe hypothalamo-hypophyso-gonadique dans des troubles de la reproduction. Ces caractéristiques font de KISS1 un nœud utile pour étudier, dans des cellules humaines, les mécanismes de suppression des métastases, la communication cellule–cellule et les réseaux géniques régulés par les hormones.

KiSS-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KISS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KISS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KISS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KISS1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.