KIR6.2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421232-ACT

Das Mausgen **Kcnj11** kodiert **KIR6.2**, die porenbildende Untereinheit eines einwärtsgleichrichtenden Kaliumkanals, die zusammen mit **SUR1/ABCC8** ATP-sensitive **KATP-Kanäle** bildet. Indem KIR6.2 das intrazelluläre **ATP/ADP-Verhältnis** an das Membranpotenzial koppelt, reguliert es die Erregbarkeit und die Kopplung von Reiz und Sekretion, insbesondere in pankreatischen **β-Zellen**, und trägt zudem zur metabolischen Sensorik in Neuronen, Herzmuskelzellen und Skelettmuskel bei. Die Regulation („Gating“) der KATP-Kanäle beeinflusst den **Calciumeinstrom**, die **Mitochondrienfunktion** und nachgeschaltete Signalwege, die die Insulinfreisetzung und zelluläre Antworten auf energetischen Stress koordinieren. Eine Fehlregulation der Aktivität von **Kcnj11/KIR6.2** ist breit relevant für Studien zur **Glukosehomöostase**, zur **β-Zell-Dysfunktion** und zu **Kanalopathien**, die elektrische Signalübertragung und Stoffwechselprozesse beeinträchtigen.

KIR6.2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Kcnj11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KIR6.2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Kcnj11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Kcnj11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KIR6.2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Kcnj11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KIR6.2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KIR6.2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Kcnj11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.