KIR4.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421234

概要

Kcnj15は、内向き整流性カリウムチャネルのサブユニットであるKIR4.2をコードしています。KIR4.2は膜タンパク質で、カリウム伝導に寄与し、興奮性細胞・非興奮性細胞のいずれにおいても静止膜電位の安定化を助けます。KIR4.2はK+フラックスを調節することで、細胞の浸透圧バランス、膜興奮性、ならびに輸送経路や電気生理学的恒常性と交差するイオン依存性シグナル伝達過程に影響を与え得ます。カリウムチャネル活性の変化は、腎臓および上皮における輸送、ニューロン／グリアの生理、ストレス応答性シグナルネットワークの研究に広く関連します。さらに、イオン制御の破綻や膜電位制御の異常は、炎症反応や組織機能障害の基盤となる機序にも関与するとされており、Kcnj15はマウスモデル系における機序解明のための経路解析ターゲットとして有用です。

KIR4.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるKcnj15遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Kcnj15内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Kcnj15のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KIR4.2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KIR4.2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Kcnj15欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KIR4.2の機能に不可欠なKcnj15エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Kcnj15ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KIR4.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびKIR4.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Kcnj15遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KIR4.2 HDRプラスミド（m）および KIR4.2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKcnj15ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKcnj15標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。