Plásmido Doble Nickase (h) KIR4.1: sc-402244-NIC

KCNJ10 codifica la subunidad del canal de potasio rectificador hacia adentro KIR4.1, un determinante clave del potencial de membrana en células gliales y epiteliales que contribuye al amortiguamiento de potasio, a la redistribución espacial de K+ y a la homeostasis osmótica. En el sistema nervioso central, la actividad de KIR4.1 en los astrocitos participa en la depuración de K+ extracelular acoplada a la captación de glutamato y al flujo de agua, influyendo en la excitabilidad neuronal y la estabilidad de las redes. El canal también interviene en procesos de transporte iónico en los epitelios del riñón y del oído interno, vinculando el manejo de K+ con el equilibrio de líquidos tisulares y el balance electroquímico. La desregulación o la variación genética en KCNJ10 se ha asociado con fenotipos de hiperexcitabilidad neurológica y con presentaciones sindrómicas de canalopatías que afectan al cerebro, el riñón y la función auditiva, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de las vías de homeostasis iónica.

KIR4.1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCNJ10 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCNJ10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCNJ10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCNJ10 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.