KIR2.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401974

概要

KCNJ2は、ヒトの内向き整流性カリウムチャネルKir2.1をコードしており、心筋および骨格筋における静止膜電位と興奮性を規定する主要因子です。Kir2.1はIK1電流を担い、終末再分極の安定化や活動電位波形の形成に寄与するとともに、膜輸送やPIP2依存的なゲーティング機構と連動して機能します。KCNJ2機能の変化はAndersen–Tawil症候群などのチャネル病（チャネロパチー）表現型と関連し、不整脈の感受性、周期性四肢麻痺、さらには興奮性組織における発生シグナル伝達にも影響し得ます。細胞モデルでは、Kir2.1活性は電気生理学的ホメオスタシス、カルシウムハンドリング、ならびに膜電位依存的な遺伝子発現制御と交差して作用します。

KIR2.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCNJ2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCNJ2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCNJ2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KIR2.1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KIR2.1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCNJ2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KIR2.1の機能に不可欠なKCNJ2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCNJ2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KIR2.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKIR2.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCNJ2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KIR2.1 HDRプラスミド（h）および KIR2.1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCNJ2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCNJ2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。